Análise do comportamento proliferativo de uma linhagem de Saccharomyces cerevisiae por citometria de fluxo

Abstract

As leveduras do gênero Saccharomyces, em especial as da espécie Saccharomyces cerevisiae, são microrganismos eucarióticos unicelulares do Reino Fungi. Possuem um papel importante em processos de fermentação, como na utilização para a produção de bebidas alcoólicas e pães, sendo considerados micro-organismos seguros para alimentos. O monitoramento das matérias-primas e da proliferação de leveduras é uma necessidade para o sucesso do processo fermentativo. Nesse sentido, a citometria de fluxo, que é um método rápido e preciso, pode se apresentar como ferramenta promissora no campo da fermentação e no controle de bioprocessos. Assim, o objetivo desse trabalho foi realizar a análise do crescimento e heterogeneidade populacional de uma linhagem comercial de Saccharomyces cerevisiae pela técnica de citometria de fluxo. Para isso foi utilizada a marcação intracelular com o fluorocromo éster succinimidílico de diacetato de carboxifluoresceína. A suspensão de levedura incorporada com o fluorocromo foi transferida para tubos de ensaio contendo 10 mL de YEPD e incubada a 25º C e foram analisadas, após diferentes tempos, por citometria de fluxo, microscopia confocal e espectrofotometria. Os resultados demonstraram que foi possível observar, por citometria de fluxo, alterações morfológicas da linhagem Saccharomyces cerevisiae ao longo do tempo, bem como quantificar o decaimento da fluorescência do corante CFSE após sucessivos processos mitóticos. Por essa técnica também foi possível mensurar o número de células da linhagem estudada ao longo do processo de multiplicação comparando-se às outras metodologias comumente utilizadas para este fim. Conclui-se com esse estudo que a citometria de fluxo mostrou-se como uma ferramenta confiável e sensível para a análise do crescimento e heterogeneidade populacional de Saccharomyces cerevisiae.