Síntese química, avaliação do potencial biológico e estudos de interação com meios biomiméticos de Glicopeptídeo-Triazóis derivados de HSP-1

Abstract

O presente trabalho propõe a glicosilação do peptídeo antimicrobiano HSP-1, composto por 14 resíduos de aminoácidos e isolado originalmente da espécie Hyla punctata (PRATES et al., 2004) empregando-se a síntese de peptídeos em fase sólida associada a reação de cicloadição catalisada por cobre (SHARPLESS et al., 2002). Para isto, foi realizada a síntese do peptídeo HSP-1 propargilado ([PAG1]HSP-1) através da metodologia de síntese de peptídeo em fase sólida (SPFS) via estratégia Fmoc. Após a confirmação da obtenção do [PAG1]HSP-1 por espectrometria de massa (MALDI-ToF), foi realizada a glicosilação com as inserções dos derivados azido acetilado de glicose e N-acetilglicosamina na presença de sulfato de cobre penta hidratado (CuSO4.5H2O) e de ascorbato de sódio como agente redutor para obtenção dos glicopeptídeo-triazóis [Glc-trz-G14]HSP-1 e [GlcNAc-trz-G14]HSP-1. Os produtos das sínteses foram purificados por cromatografia líquida de alta eficiência de fase reversa (CLAE-FR) e também caracterizados por espectrometria de massa (MALDI-ToF), confirmando a formação regiosseletiva dos glicopeptídeo-triazóis sem produção de subprodutos da glicosilação. Os estudos biológicos comparativos entre o peptídeo HSP-1 e de suas formas glicosiladas revelaram que as modificações químicas não alteraram significativamente a eficácia do HSP-1 contra agentes bacterianos. Entretanto, os testes antifúngicos demonstraram melhor atividade fungicida para os glicopeptídeos quando comparado ao peptídeo HSP-1. Foram ainda realizados estudos conformacionais e de interação entre o peptídeo e os glicopeptídeos com vesículas fosfolipídicas de caráter zwitteriônico (POPC) e aniônico (POPC/POPG). Os estudos conformacionais empregando-se a técnica de Dicroísmo Circular (CD) revelaram menor teor de helicidade tanto em LUV’s de POPC quanto de POPC/POPG para os glicopeptídeos em relação a HSP-1. Os estudos de interação foram realizados empregando-se as técnicas de espalhamento de luz dinâmico (DLS), potencial zeta () e extravasamento de carboxifluoresceína (CF). De uma maneira geral, verifica-se que a variação no diâmetro hidrodinâmico (Dh) para vesículas ii zwitteriônicas POPC e aniônicas POPC/POPG é maior para os glicopeptídeos [Glc-trz-G14]HSP-1e [GlcNAc-trz-G14]HSP-1 em relação ao HSP-1. Por outro lado, a variação do potencial zeta tanto em vesículas zwitteriônicas quanto em vesículas predominantemente negativas causada por HSP-1 foi maior em comparação ao efeito causado pelas formas glicosiladas. E por fim, os resultados de extravasamento de carboxifluoresceína induzida por cada espécie (HSP-1, [Glc-trz-G14]HSP-1 e [GlcNAc-trz-G14]HSP-1) mostrou que a capacidade lítica dos glicopeptídeos é ligeiramente maior em ambos os meios biomiméticos quando comparados com o peptídeo HSP-1. Assim sendo, este trabalho mostrou que a presença do anel triazólico pode ser responsável pela maior atividade antifúngica dos glicopeptídeos [Glc-trz-G14]HSP-1 e [GlcNAc-trz-G14]HSP-1 em relação ao peptídeo HSP-1.